Hypertension Pulmonaire : Physiopathologie et Innovation Thérapeutique

L'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est caractérisée par l’augmentation de la pression artérielle pulmonaire. Les patients sont jeunes et ont une courte espérance de vie. L'HTAP résulte d’une dysfonction des cellules vasculaires pulmonaires due à l’acquisition d'un phénotype pro-prolifératif et anti-apoptotique. Ce phénotypique s’explique par une dérégulation de l'expression génique dont les causes restent mal comprises. L’HTAP peut, entre autres, être due à des mutations génétiques. L’étude de ses causes génétiques, a démontré la pertinence d’étudier ces mutations pour toutes les formes d’HTAP. De nombreuses mutations ont été identifiées, mais leur rôle reste, souvent, à définir. Parmi ces mutations, les mutations gain de fonction du facteur de transcription T-box transcription factor 4 (TBX4) sont d’un intérêt particulier, car, 1- Ces mutations sont fréquentes dans les cas d’HTAP génétiques. 2- TBX4 est réactivé dans les formes non-génétiques 3- Le rôle de TBX4 reste mal compris. 4- Nos données montrent que TBX4 régule l’expression des protéines de liaisons à l’ARN. 5- TBX4 régule le développement embryogénique pulmonaire. Basé sur ces données, j’émets l’hypothèse que TBX4 participe à la dérégulation de l’expression génique et à la prolifération des cellules vasculaires pulmonaires au cours du développement de l’HTAP. J’émets également l’hypothèse que les cibles secrétées de TBX4 sont des biomarqueurs potentiels de la sévérité de l’HTAP. Pour répondre à ces hypothèses, j’ai défini quatre objectifs : 1- Déterminer les types cellulaires exprimant TBX4 et les cibles de TBX4 chez les patients atteints d’HTAP porteurs ou non de mutation TBX4. 2- Déterminer le rôle de TBX4 à travers la régulation de ses cibles dans le phénotype des cellules exprimant TBX4 dans les poumons HTAP. 3- Tester si la restauration de l’expression de TBX4 dans des modèles murins d’HTAP prévient, renverse ou bloque le développement de l’HTAP.

Le syndrome de détresse respiratoire de l'adulte (SDRA) est une atteinte pulmonaire aigüe complexe sans traitement curatif. La rupture de la barrière alvéolo-capillaire et l'inflammation dérégulée sont des caractéristiques de l’atteinte pulmonaire aigüe communes à toutes les étiologies de SDRA sans que les mécanismes sous-jacents soient connus. Des données préliminaires solides et l’expertise des deux partenaires indiquent que la voie de signalisation de la leptine pourrait jouer un rôle physiopathologique sur l’intégrité de la barrière microvasculaire pulmonaire, potentiellement via des modifications post-transcriptionnelles de la méthylation de l’ARN au niveau de la N6-méthyladénosine (m6A). L’objectif global de ce projet est d’explorer les interactions qui existent entre la signalisation de la leptine et la voie de régulation de la méthylation de l’ARN au niveau m6A dans le poumon, et comment ces interactions impactent l’intégrité et la fonction de la barrière alvéolo-capillaire dans les lésions pulmonaires aigües. Notre approche innovante, grâce à des stratégies in vivo, in situ, ex vivo et in vitro et des modèles de souris transgéniques, ainsi que notre expertise complémentaire vont permettre de découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques afin de rétablir l’homéostasie de la barrière alvéolo-capillaire, ce qui améliorera le pronostic des patients. Depuis la pandémie du coronavirus (COVID)-19, le besoin urgent de nouvelles thérapies curatives qui restaureraient l’intégrité de la barrière alvéolo-capillaire dans l’atteinte pulmonaire aigüe est clair. Notre projet interdisciplinaire s’appuie sur des résultats préliminaires solides et des innovations conceptuelles et techniques essentielles à la meilleure compréhension de la physiopathologie de l’atteinte pulmonaire aigüe, à la base de la faisabilité de ce projet à fort potentiel en vue du développement de thérapies innovantes et ciblées dans le SDRA fin d’améliorer la prise en charge et la survie des patients.

Que ce soit dans le domaine civil ou militaire, le traumatisme sévère est un problème de santé publique majeur qui touche une population jeune, et dont la morbi-mortalité augmente à l’échelle mondiale. Avec le retour de la guerre de haute intensité en Europe et son grand nombre de victimes, la prise en charge des traumatisés sévères devient un enjeu stratégique. Le choc hémorragique demeure la première cause de décès des patients traumatisés sévères en particulier du fait du développement de défaillances d’organes. Celles-ci sont à l’origine d’un nombre croissant de décès dans les premières heures. Ces défaillances s’installent très précocement, pendant ou après l’épisode hémorragique initial. Elles deviennent une problématique critique en cas de choc prolongé ou de prise en charge initiale (pré-chirurgicale) longue comme c’est le cas en conflit de haute intensité. La physiopathologie des défaillances d’organes est mal connue actuellement. La caractérisation de cette physiopathologie du choc hémorragique et des défaillances secondaires selon des méthodes nouvelles et sans a priori possède un potentiel disruptif pour proposer de nouvelles thérapeutiques dans le but d’améliorer la survie et de diminuer la morbidité. Ces dernières années ont été marquées par le développement de systèmes de séquençage de cellules uniques permettant de caractériser quantitativement et qualitativement la composition cellulaire et moléculaire des tissus. Elles sont à l’origine d’une révolution de la compréhension de nombreuses maladies. Nous avons choisi d’étudier deux défaillances d’organes particulière en focalisant nos efforts sur la caractérisation exhaustive de l’atteinte rénale et pulmonaire. Le rein est un organe sentinelle en traumatologie, les défaillances rénales et pulmonaires sont les plus problématiques en termes de morbidité et d’association à la mortalité et enfin il existe une association entre leurs défaillances respectives. L’objectif principal de ce projet est de caractériser sous la forme d’un atlas cellulaire et moléculaire les signatures de transcriptomique spatiale des défaillances rénales et pulmonaires au cours du choc hémorragique traumatique à l’échelle cellulaire et sub-cellulaire. Nous avons opté pour un modèle porcin réanimé de manière prolongée. Les objectifs secondaires sont l’identification des voies biologiques et moléculaires impliquées dans la physiopathologie, l’identification de biomarqueurs et de cible thérapeutiques nouvelles ainsi que l’identification de l’interaction entre le rein et le poumon à la phase aiguë du choc hémorragique.

L'étude, fruit de la collaboration étroite entre deux partenaires de recherche complémentaires initiée il y a trois ans, se concentre sur l'exploration de l'impact de l'inflammation microenvironnementale sur la composition de la membrane basale capillaire. Elle examine le rôle des protéines matricellulaires (MPs) et d'autres protéines clés impliquées dans le remodelage de la matrice dans le processus critique de raréfaction capillaire observé dans l'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP). En utilisant des techniques avancées telles que le séquençage de l'ARN à cellule unique et la transcriptomique spatiale (MERFISH), notre analyse approfondie de 7 patients atteints d'HTAP idiopathique et de 7 témoins a révélé une réduction significative des cellules endothéliales capillaires (aCap), accompagnée d'une infiltration macrophagique (C1Q+), notamment dans la région périvasculaire. L'analyse du transcriptome différentiel a mis en évidence une surexpression de protéines matricellulaires importantes telles que SPARCL1 et FSTL3, ainsi que d'autres cibles d'intérêt, notamment BMP-6, cadhérine-13 et CD36. De manière intéressante, l'augmentation de la forme monomérique de SPARCL1 est observée avant la perte d'expression de VEGFR2 et coïncide avec le remodelage vasculaire pulmonaire dans le modèle d'hypertension pulmonaire induite par la monocrotaline. Le projet vise à valider ces résultats et à élucider comment le changement de composition des MPs dans la membrane basale capillaire, orchestré par des sous-types cellulaires inflammatoires spécifiques, contribue à la raréfaction capillaire (aCap). Les travaux sont organisés en trois volets : WP1 pour révéler les sous-types cellulaires inflammatoires et les mécanismes régissant la sécrétion de MPs, WP2 pour examiner l'impact des MPs sécrétées par les cellules inflammatoires sur le microenvironnement de la matrice et la biologie des cellules endothéliales vasculaires, et WP3 pour évaluer si la présence de MPs dans le sang peut servir de biomarqueurs du remodelage vasculaire pulmonaire chez les patients atteints d'HTAP.

Contexte : l'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie rare et incurable touchant des personnes de tous âges. Elle se caractérise par un remodelage obstructif des petites artères pulmonaires, responsable d'une augmentation de la pression artérielle pulmonaire, conduisant à une insuffisance cardiaque droite et au décès en l'absence de traitement. L'HTAP peut être associée à diverses maladies, mais environ la moitié des cas d'HTAP sont idiopathiques ou héréditaires et pourraient se développer à la suite d'un "second hit", comme le suggère l'identification de cas d'HTAP associés à la prise de médicaments anorexigènes, de métamphétamine et à l'exposition professionnelle à des solvants organiques. Aucune étude n'a analysé de manière systématique l'exposome de patients atteints d'HTAP, en associant les expositions environnementales et professionnelles ainsi que les drogues et médicaments. Objectif principal : caractériser l'exposome au moment du diagnostic de l'HTAP et évaluer son rôle dans le développement de l'HTAP. Méthodologie : La première étape sera une étude cas-témoins, pour caractériser l'exposome au moment du diagnostic chez les patients diagnostiqués dans les centres de compétence du réseau français de l'HTAP, en utilisant une combinaison de méthodes directes (spectrométrie de masse sur cheveux et urines) et indirectes (questionnaires et matrices emploi exposition, en collaboration avec des équipes expertes). La deuxième étape consistera à analyser l'effet de toxiques identifiés dans la première partie de l'étude et dans la littérature, au niveau cellulaire vasculaire pulmonaire endothélial et dans les modèles animaux d'HTAP, afin de déterminer les mécanismes de toxicité vasculaire pulmonaire de ces toxiques et leur rôle dans la physiopathologie de l'HTAP. Perspectives : Ce projet permettra de mieux comprendre le rôle de l'exposome dans le développement de l'HTAP dite "idiopathique" et d'identifier de nouveaux mécanismes dans l'HTAP.

La transplantation est le meilleur traitement de l'insuffisance rénale terminale. Le conditionnement du donneur est crucial pour éviter la reprise retardée de fonction du greffon (RRF), qui survient dans 30% des cas et est associée à la perte du greffon. Un tiers des donneurs en état de mort cérébrale présente un arrêt cardiaque récupéré (ACR), entrainant une première ischémie rénale avant prélèvement. Même si l'ischémie est délétère, les études n'ont pas trouvé d'association entre l'ACR du donneur et la RRF. Notre hypothèse est que l'intervalle de temps entre l'ACR (1ère ischémie) et le prélèvement du greffon (2ème ischémie) pourrait influencer la fonction du greffon. Grâce au registre CRISTAL, nous avons montré qu'un délai entre prélèvement et greffe inférieur à 3 jours est en effet associé à un risque plus élevé de RRF après ACR. Plusieurs études suggèrent que les cellules prolifératives sont plus sensibles à la déplétion énergétique. Puisqu'une ischémie induit la prolifération des cellules épithéliales rénales, le prélèvement du greffon pendant la phase proliférative de l'épithélium tubulaire consécutive à l'ACR pourrait favoriser la RRF. PRIOR testera cette hypothèse chez l'homme, la souris et le porc. Dans les biopsies humaines, la prolifération et la mort cellulaire seront quantifiées au moment de la greffe et corrélées à la fonction du greffon. Chez la souris, la corrélation entre la prolifération et la RRF sera directement évaluée à l'aide d'un clamp vasculaire conçu pour induire des ischémies multiples et de la manipulation pharmacologique du cycle cellulaire. Enfin, chez le porc, nous testerons non seulement l'hypothèse de la prolifération mais nous identifierons aussi de nouvelles voies candidates grâce au séquençage de l'ARN. La combinaison des données humaines avec deux modèles animaux complémentaires a le potentiel d'améliorer la qualité des greffes en définissant un intervalle de temps optimal pour le prélèvement après un ACR.

Le syndrome de défaillance multiviscérale post-traumatique est une complication grave du traumatisme sévère qui atteint souvent la fonction rénale et entraîne une insuffisance rénale aigue (IRA). Bien que la transfusion soit la pierre angulaire du traitement du traumatisme sévère, son emploi est associé à un risque accru d’IRA. Les globules rouges (GR) stockés présentent une altération de l’homéostasie du monoxide d’azote (NO) qui diminuerait la biodisponibilité du NO après transfusion entraînant une baisse de la perfusion tissulaire. De plus, la transfusion de GR stockés est associée à un relargage d’hémoglobine libre (Hb), produit de dégradation du GR, qui favorise l’apparition d’une IRA. Bien que les mécanismes liant l’Hb à l’IRA soient incomplètement compris, ils incluent une majoration du stress oxydant rénal et des effets rénaux pro-inflammatoires. Des études complémentaires sont donc nécessaires pour mieux appréhender les mécanismes sous-jacents de la toxicité des GR stockés et de l’Hb. En utilisant des modèles expérimentaux de traumatisme sévère (choc hémorragique/rhabdomyolyse), des modèles in vitro de cellules tubulaires rénales exposées aux GR stockés et à l’Hb et des études observationnelles sur la fonction des GR et le rôle de l’Hb chez les patients traumatisés, le projet HEMAKI propose une approche translationnelle de la cellule au lit du patient qui vise à 1/ mieux comprendre les rôles spécifiques des GR stockés et de l’Hb dans l’IRA post-traumatique, 2/ évaluer si leur action interagit synergiquement avec les agressions habituellement rencontrées dans le traumatisme sévère (hémorragie, rhabdomyolyse), 3/ proposer des thérapeutiques qui ciblent les effets secondaires de la transfusion liés aux GR stockés et à l’Hb. La transfusion étant la base de la réanimation des patients traumatisés, la recherche translationnelle visant à corriger les effets microcirculatoires rénaux des GR stockés et de l’Hb pourrait avoir un impact majeur en pratique clinique.

Les maladies cardiométaboliques sont la première cause de décès dans le monde. L'activité phosphatase de l'époxyde hydrolase soluble (sEH-P) métabolise des médiateurs lipidiques liés aux maladies cardiométaboliques . Ce projet vise à déterminer le rôle physiologique de la sEH-P et si son inhibition permet de traiter les maladies cardiométaboliques . Le réseau proposé est centré autour du Pr. Bellien (Université de Rouen) qui étudie l'impact de l’inactivation génétique de la sEH-P et le Pr. Proschak (Université de Goethe) qui poursuivra le développement d'outils pharmacologiques permettant l'inhibition périphérique et centrale sélective de la sEH-P chez les rongeurs et l'homme. Après leur validation, l'impact de ces inhibiteurs, sera testé et comparé à celui de l'inactivation génétique dans des modèles animaux de maladies cardiométaboliques, avec le Dr Guignabert (Université Paris-Sud) pour l'hypertension pulmonaire et les aspects mécanistiques cellulaires. Le Dr Morisseau (UC Davis) apportera les outils biochimiques et analytiques nécessaires au projet.

L'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie mortelle et énigmatique affectant l’arbre vasculaire pulmonaire avec d'importants besoins médicaux non satisfaits. L'HTAP se caractérise par une pan-vasculopathie complexe impliquant une prolifération excessive et une dysfonction de plusieurs types cellulaires, ainsi que par une inflammation et une fibrose de la vascularisation pulmonaire, conduisant à une augmentation de la pression artérielle pulmonaire qui évolue vers l’insuffisance cardiaque droite. L’HTAP peut être idiopathiques ou héréditaires. Les mutations du gène BMPR2 sont à l’origine de la plupart des formes héritables de cette maladie. Récemment, notre groupe et d'autres avons démontré que la perturbation du métabolisme cellulaire ainsi que la rigidification de la matrice extracellulaire (MEC) périvasculaire favorisent le développement de l’HTAP. En réponse à des stress hormonaux, inflammatoires et environnementaux tels que l'hypoxie/l'ischémie ou l’étirement pariétal des artères, les fibroblastes adventitiels de l'artère pulmonaire (FAAPs) sont les premières cellules vasculaires à présenter des signes d'activation. Les FAAP activés sont responsables d’un dépôt périvasculaire de collagène et d’un remodelage actif de la MEC - autant de processus qui nécessitent de l'énergie. Pourtant, on ne sait pas si et comment la reprogrammation du métabolisme des cellules vasculaires répond aux besoins métaboliques des FAAPs activés et affecte le remodelage de la MEC. Les manifestations des symptômes, y compris l'essoufflement et l'insuffisance cardiaque droite, arrivent souvent tardivement au cours de l’HTAP. Par conséquent, le délai entre le diagnostic et l’issue de la maladie est court, et les échantillons pulmonaires pertinents pour l’étude de l'HTAP ne peuvent être obtenus qu’au stade terminal de son évolution, c’est-à-dire au décès du patient ou après la transplantation pulmonaire. Cela limite intrinsèquement notre capacité à obtenir une signature moléculaire de la maladie à des moments déterminants, tels que son initiation et les étapes de son développement. Pour mieux comprendre la physiopathologie de l’HTAP, des modèles animaux ont été développés. En dépit des efforts déployés, aucun d’eux ne mime parfaitement l'HTAP. De plus, ils offrent un accès limité à l'évolution de la maladie. Pour saisir les bases moléculaires de la pathologie, nous avons développé les premiers rats mutés pour le gène Bmpr2. De façon remarquable, ces rats reproduisent des dysfonctionnements cellulaires et moléculaires majeurs décrits dans l'HTAP. Peut-être plus important encore, ces rats développent un HTAP progressive dont la pénétrance augmente au cours du temps. Ce modèle unique permet ainsi des études moléculaires et cellulaires propre à définir les déterminants de l'évolution de l’HTAP. Nous proposons donc de tirer profit de la disponibilité unique au sein de notre partenariat, de cellules primaires isolées de patients atteints d’HTP/HTAP, de modèles de rongeurs d’HTP dans lesquels nous avons une grande expertise et d’échantillons biologiques humains présents dans une grande biobanque de plasma et de tissus pour comprendre la relation causale entre l'activation des FAAPs, leur métabolisme et le remodelage et la rigidification de la MEC périvasculaire au cours de l'évolution de l’HTP. Grâce à une combinaison d'approches transdisciplinaires incluant la biologie moléculaire, la métabolomique, la bioinformatique et des modèles précliniques, nous proposons de dévoiler le fondement moléculaire du remodelage de la MEC dans l’HTAP. Au final, déchiffrer la relation causale entre le métabolisme des FAAPs activés et la synthèse du collagène, ainsi que révéler le circuit moléculaire qui contrôle la reprogrammation du métabolisme des FAAPs, fournira donc des informations essentielles sur l'origine moléculaire de l’HTAP, identifiant ainsi des stratégies thérapeutiques innovantes et jamais envisagées centrées sur le métabolisme des FAAPs.

Que ce soit dans le domaine civil ou militaire, la traumatologie sévère est un problème de santé publique qui touche une population jeune avec un impact majeur en termes de mortalité et de morbidité. Le choc hémorragique demeure la première cause de décès des patients traumatisés sévères, soit dans les suites immédiates du traumatisme du fait d'un choc hémorragique incontrôlable, soit dans les suites tardives du traumatisme en rapport avec les dysfonctions d'organes liées à l'hypoperfusion prolongée induite par l'hémorragie. La rhabdomyolyse, secondaire à l'attrition tissulaire traumatique, est fréquemment associée à l'hémorragie et peut entrainer une défaillance d'organe, notamment rénale. Au cours de l'hémorragie, la diminution de la pression transglomérulaire ainsi que la baisse de la perfusion tubulaire (hypoxie tubulaire) entraînent une agression rénale à même de générer une insuffisance rénale aigue. La rhabdomyolyse, quant à elle, exerce son effet délétère rénal à plusieurs niveaux : une vasoconstriction intrarénale, des lésions tubulaires directes par l'intermédiaire d'un stress oxydant excessif, une obstruction de la lumière tubulaire rénale et une inflammation rénale. Les études les plus récentes rapportent des incidences d'insuffisance rénale aigue jusqu'à 50% chez les patients victimes de traumatisme sévère. Dans une série de patients traumatisés militaires français et dans une série de patients traumatisés civiles en Ile de France (données des partenaires du projet), la sévérité du choc hémorragique et l'intensité de la rhabdomyolyse étaient les deux facteurs majeurs associés à la survenue d'une insuffisance rénale aigue. La myoglobine est à l'heure actuelle un des médiateurs principaux de la toxicité rénale de la rhabdomyolyse. Des travaux récents conduits sur vaisseau isolé suggèrent que la myoglobine exacerbe l'effet vasoconstricteur rénal de molécules fortement sécrétées au cours de l'hémorragie. Ceci suggère une synergie délétère entre l'hémorragie et la rhabdomyolyse sur la fonction rénale. Actuellement, il n'existe pas de thérapie ciblant spécifiquement l'action de la rhabdomyolyse (dont la myoglobine) au cours de l'hémorragie traumatique puisque la réanimation de la rhabdomyolyse dans un contexte d'hémorragie traumatique demeure symptomatique par le biais d'une hydratation importante. Nous nous proposons d'identifier les effecteurs précoces les plus délétères de la rhabdomyolyse au cours de l'hémorragie et d'explorer si leur éviction (par adsorption précoce) prévient la dysfonction rénale induite par l'association hémorragie/rhabdomyolyse. Ce travail considèrera l'interaction entre l'hémorragie et la rhabdomyolyse à partir d'un modèle de choc hémorragique porcin au cours duquel les perfusions médullaire et corticale ainsi que l'oxygénation rénale sont bien caractérisées. Nous avons opté pour une approche linéaire et progressive en 3 séries expérimentales. La 1° série expérimentale vise à caractériser l'agression combinée de l'association rhabdomyolyse/choc hémorragique au niveau rénal. Ceci permettra de percevoir l'acmé de cette agression rénale et donc de proposer une stratégie thérapeutique dont le timing est optimal pour prévenir l'insuffisance rénale aigue. La 2° série expérimentale vise à démontrer que la myoglobine est l'élément étiologique majeur de la rhabdomyolyse qui participe à l'agression rénale au cours de l'hémorragie. Ceci permettra d'établir que la myoglobine est une cible d'intérêt pour prévenir l'insuffisance rénale aigue au cours d'une hémorragie. La 3° série expérimentale visera à étudier l'effet de l'hémo-adsorption précoce de la myoglobine sur la perfusion, l'oxygénation et la fonction rénale. L'objectif étant de démontrer l'intérêt thérapeutique d'une stratégie d'épuration pour prévenir la défaillance rénale.

L'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie dévastatrice, conséquence d'une obstruction progressive des artères pulmonaires distales, induisant une élévation des résistances vasculaires pulmonaires, une hypertrophie ventriculaire droite et à terme une insuffisance cardiaque. La physiopathologie de l'HTAP est multifactorielle et implique les cellules musculaires lisses et cellules endothéliales des artères pulmonaires (CML-AP et CE-AP) et les cardiomyocytes du ventricule droit (VD), caractérisées par une prolifération anormale, une inflammation, une vasoconstriction et une altération de la contractilité du VD. Malgré les traitements actuels ciblant les voies du monoxyde d’azote, de l'endothéline et de la prostacycline, la mortalité reste élevée après 3 ans (30-40%) et la transplantation pulmonaire reste la seule thérapie pour les patients éligibles. 8 mutations du gène KCNK3 ont été identifiées chez des patients atteints d'HTAP. KCNK3 (ou TASK1) code pour un canal potassique. Chaque mutation identifiée induit une perte de fonction du canal et j'ai montré que la perte de fonction/expression de KCNK3 aux niveaux vasculaire pulmonaire et cardiaque est observée dans différentes HTAP humaines et expérimentales. Ainsi, KCNK3 est devenu une cible thérapeutique attrayante pour toutes les formes d'HTAP et pas seulement pour les patients mutés KCNK3. Cependant, les conséquences des dysfonctions de KCNK3 et les mécanismes moléculaires responsables de ces dysfonctions au cours de l’HTAP restent à élucider. Il est également nécessaire d’apporter des preuves expérimentales de l'efficacité d’une thérapie génique ciblant KCNK3 ou d’un ciblage pharmacologique des voies en aval de KCNK3 dans l'HTAP. KCNK3 n’étant pas fonctionnel au niveau des CML-AP de souris. Nous avons généré des rats déficients pour Kcnk3 par la technologie CRISPR-Cas9 afin d’induire la perte de la protéine KCNK3. Ces rats mutés Kcnk3 sont donc essentiels pour étudier le rôle de KCNK3 au niveau cardio-pulmonaire. Le projet a quatre objectifs principaux, concernant des questions fondamentales, expérimentales et précliniques liées à la dysfonction de KCNK3 dans la physiopathologie de l'HTAP. 1: Comprendre le rôle de la dysfonction de KCNK3 dans le déséquilibre de la balance prolifération/apoptose dans l’HTAP. 2 : Identifier les mécanismes responsables de la dysfonction de KCNK3 dans l’HTAP 3: Confirmer l’implication de KCNK3 dans la physiopathologie de l'HTAP avec les rats mutés Kcnk3 4: Identifier une thérapie ciblant KCNK3 pour l'HTAP Ainsi nous utiliserons des CML-AP et CE-AP isolées de patients atteints d'HTAP et de rats mutés Kcnk3 ce qui nous permettra de décrire les conséquences de l’inactivation de KCNK3 au niveau cardio-pulmonaire. Pour finir, nous nous attendons à ce que la ré-expression de KCNK3 par thérapie génique ou le ciblage pharmacologique des voies dépendantes de KCNK3 réduisent l'HTAP. Les résultats de patch-clamp confirment que la fonction de KCNK3 est absente dans les CML-AP isolées de rats mutés Kcnk3 ce qui est associé à une dépolarisation importante des CML-AP. De plus, à l’âge de 3 mois ces rats présentent une muscularisation anormale des artérioles pulmonaires, une augmentation des pressions sanguines du VD et une sur-activation des MAPkinases. Ces résultats préliminaires valident le modèle de rat transgénique et suggèrent que ces rats mutés pourraient être un modèle animal indispensable pour identifier de nouveaux acteurs moléculaires impliqués dans le remodelage vasculaire pulmonaire et cardiaque au cours de l’HTAP. Ainsi, la faisabilité de ce projet ne fait aucun doute, car il est soutenu par de nombreux résultats préliminaires et parce qu’il sera réalisé au sein du Centre National de Référence de l'Hypertension Pulmonaire auquel appartient notre unité INSERM Le caractère novateur du projet repose sur la possibilité de développer une thérapie ciblé d’un canal ionique pour cette pathologie cardio-pulmonaire dévastatrice.